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豬乙型腦炎抗測(cè)試方法

產(chǎn)品型號(hào):

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪問(wèn)量:1013

更新時(shí)間:2024-07-11

簡(jiǎn)要描述:

豬乙型腦炎抗測(cè)試方法
豬乙型腦炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒系由預(yù)包被豬乙型腦炎病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬乙型腦炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬乙型腦炎病毒抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異

詳細(xì)說(shuō)明:

豬乙型腦炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

使用說(shuō)明書(shū)


產(chǎn)品名稱(chēng)

通用名:豬乙型腦炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)


包裝規(guī)格

96T×1/


檢測(cè)原理

  本試劑盒由預(yù)包被豬細(xì)小病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬乙型腦炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬乙型腦炎病毒抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬乙型腦炎病毒抗體。


試劑盒組成

序號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格/96T×1

1

酶標(biāo)記物

12ml×1(紅蓋)

2

樣品稀釋液

22ml×1(黃蓋)

3

20X濃縮洗滌液

40ml×1(藍(lán)蓋)

4

底物液A

6ml×1(白蓋)

5

底物液B

6ml×1(黑蓋)

6

終止液

12ml×1(黃蓋)

7

陽(yáng)性對(duì)照

1.0 ml×1(紅蓋)

8

陰性對(duì)照

1.0 ml×1(綠蓋)

9

酶標(biāo)板

96T×1

10

封板膜

1

11

說(shuō)明書(shū)

1


儲(chǔ)存及有效期

28℃保存,有效期12個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請(qǐng)于28℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。


適用儀器

450nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。


樣品準(zhǔn)備

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于28℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2.根據(jù)樣本數(shù)量準(zhǔn)備對(duì)應(yīng)數(shù)量的小刻度EP管或血清稀釋盤(pán),用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋?zhuān)ㄈ?/span>4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,混勻)陰性、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)


檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各1孔,未用的板條盡快密封,28℃保存。

3.陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加250ul工作洗滌液,用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,每次洗滌后需拍干液體。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.甩去孔內(nèi)液體,每孔加250ul工作洗滌液,用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,每次洗滌后需拍干液體。

8.根據(jù)樣本數(shù)量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。每孔加100ul,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液100μl,混勻,于450nm 測(cè)定各孔吸光值(OD值),


參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陽(yáng)性對(duì)照OD-陰性對(duì)照OD0.2。


檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1. S/P(樣本OD-陰性對(duì)照OD)/(陽(yáng)性對(duì)照OD-陰性對(duì)照OD)

2. S/P0.4時(shí)結(jié)果判讀為陽(yáng)性。

3. 0.2S/P0.4時(shí)結(jié)果為疑似陽(yáng)性;若接種過(guò)對(duì)應(yīng)疫苗,則提示抗體水平不足,建議補(bǔ)打疫苗。

4. S/P0.2時(shí)結(jié)果判讀為陰性。


試驗(yàn)方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中豬乙型腦炎病毒抗體的粗略評(píng)估。

2. 本試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)。


注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。


生產(chǎn)企業(yè)

企業(yè)名稱(chēng):賽諾利康生物技術(shù)(北京)有限公司

地    址:北京市昌平區(qū)科技園超前路甲1號(hào)11號(hào)樓7





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